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技術(shù)文章

組織病理切片以及HE染色

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組織病理切片以及HE染色 

(一)實驗原理:蘇木素-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)能較好地顯示組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài),可用于觀察、描述正常和病變組織的形態(tài)學(xué),而且HE切片可較長時間保存,被稱為常規(guī)染色方法。

(二)實驗步驟: 一、制作切片 

1、取材、固定:取小鼠腎臟組織適當(dāng)大小,并且放入盛有固定液的小瓶中保存。 

2、組織的脫水、透明、浸蠟與包埋 

組織固定后還需經(jīng)過脫水、透明、浸蠟等過程才能制成蠟塊,進(jìn)行石蠟切片。脫水是指用某些溶媒置換組織內(nèi)水分的過程。組織脫水后,必須經(jīng)過一種既能與酒精相混合又能溶解石蠟的溶劑,通過這種溶劑的媒介作用,使石蠟浸入組織塊。在此過程中,因組織塊中的水分被溶劑所取代,組織塊變得透亮,因此稱之為透明。組織染色后也要進(jìn)行透明。zui常用的透明劑為二甲苯,處理時間為30min左右。

組織經(jīng)透明后在溶化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱浸蠟。用其他浸透劑(如火棉膠、碳蠟和明膠等)滲入組織內(nèi)部的過程稱為浸透或透入。為使石蠟充分滲入組織塊中,常需經(jīng)過3小時的浸漬,期間需更換3次石蠟。一般用于浸蠟的石蠟熔點為52-56℃。 

組織塊經(jīng)過浸蠟或浸透,用包埋劑(石蠟、火棉膠、碳蠟和樹脂等)包起的過程稱包埋,包埋后便制成含組織的塊。這種包埋塊可使組織達(dá)到一定的硬度和韌度,有利于切成薄片。石蠟包埋是病理日常工作中zui常用的包埋方法。用于包埋的石蠟熔點一般為60℃左右。但在有些情況下,如某些酶染色時,則需采用低溫石蠟包埋,以保存組織內(nèi)酶的活性。 3、切片、制片 

石蠟切片常用的切片機(jī)有輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)和平推式切片機(jī),以前者為多用。切片厚度一般為3-5μm。切片時先將組織片平攤于一塊玻璃上,迅速滴加30%的酒精水溶液使組織片*展開,再移入40℃恒溫?zé)崴髦小R部芍苯訉⒔M織切片移入40℃的恒溫?zé)崴髦校M織片*展開后將其貼附于載玻片上,經(jīng)56-60℃烤片30-60min后即可進(jìn)行染色。 

二、HE染色

1. 二甲苯脫蠟2×10 min; 

2. 無水乙醇洗去二甲苯2×5min; 

3. 95%、80%乙醇各l0 min,自來水洗l min(不要讓急水直接沖至載玻片上的組織),蒸餾水洗1min; 

4. 蘇木素染色4 min,自來水洗2 min; 

5. 1%鹽酸酒精分化20 s(鏡下控制),自來水洗2 min; 

6. 1%稀氨水返藍(lán)30s(鏡下控制),自來水洗2分鐘,蒸餾水洗1min; 

7. 伊紅染色90s; 

8. 80%乙醇脫水10s,95%酒精10s,無水乙醇5min; 

9. 無水乙醇10min; 

10.二甲苯2×10 min; 

11.中性樹膠或加拿大樹膠封片。 

(三)實驗結(jié)果:細(xì)胞核呈藍(lán)色;細(xì)胞漿、肌肉、結(jié)締組織、紅細(xì)胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色。 

(四)實驗分析:HE染色時病理學(xué)中常用的一種診斷方法,通常將病理切片染色后再在顯微鏡下觀察組織的病理學(xué)變化,從而做出病理學(xué)診斷。 

TEL:18016231680

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