原理與基本操作

 

　　賽默飛nanodrop紫外分光光度計的工作原理基于朗伯-比爾定律，這一定律描述了溶液對光的吸收與溶質濃度之間的關系。儀器通過一個光源發(fā)出特定波長的光束，穿過樣品后，檢測器測量透射光的強度。吸光度（A）可以表示為：

 

　　\[A=\log\left(\frac\right)\]

 

　　其中，\(I_0\)為入射光強度，\(I\)為透射光強度。通過測量吸光度，可以推算出樣品的濃度。

 

　　核酸和蛋白質定量

 

　　在生物化學實驗室中，核酸（DNA和RNA）和蛋白質的定量是常見的應用之一。通過測量不同波長下的吸光度，可以準確地確定這些生物分子的濃度。

 

　　1.核酸定量：

 

　　DNA和RNA在260nm波長處具有最大吸收峰。通過測量260nm下的吸光度（A260），并利用標準曲線或已知的吸光系數(shù)，可以計算核酸的濃度。此外，通過測量A260/A280的比值，可以評估樣品的純度。例如，A260/A280比值為1.8-2.0通常表明DNA樣品較為純凈。

 

　　2.蛋白質定量：

 

　　蛋白質通常在280nm處有顯著吸收，這主要源于酪氨酸和色氨酸殘基。測量A280可以直接用于蛋白質定量。然而，由于蛋白質的復雜性，通常還會結合其他方法，如BCA法、Bradford法等，確保結果準確。

 

　　酶動力學研究

 

　　在酶動力學研究中也是重要的工具。通過監(jiān)測底物或產(chǎn)物在特定波長下的變化，可以實時觀察酶反應的進程，計算酶的動力學參數(shù)，如Km和Vmax。例如，在β-半乳糖苷酶催化反應中，ONPG（鄰硝基苯基-β-D-半乳糖苷）作為底物，其水解產(chǎn)物在420nm處具有吸收峰，通過測量吸光度的變化，可以精確監(jiān)控反應速度。

 

　　光譜特性分析

 

　　還用于測定各種生物分子和化合物的光譜特性。每種物質都有其光譜圖，通過與已知光譜庫的比較，可以進行物質的定性分析。例如，輔酶NADH和NADPH在340nm處有特征吸收峰，通過光譜分析，可以區(qū)別并定量這些輔酶。

 

　　藥物檢測與分析

 

　　在藥物研發(fā)和質量控制中，賽默飛nanodrop紫外分光光度計是一種重要的分析工具。它可以快速測定藥物在不同溶液中的溶解度、穩(wěn)定性和含量。例如，阿司匹林在紫外區(qū)域有特定的吸收峰，通過測量其吸光度，可以迅速評估藥物的純度和含量。

 

　　細胞培養(yǎng)和活力檢測

 

　　賽默飛nanodrop紫外分光光度計在細胞生物學中也有廣泛應用。細胞培養(yǎng)過程中，常需要測定培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質和代謝產(chǎn)物的濃度。例如，通過測量葡萄糖和乳酸在特定波長下的吸光度變化，可以了解細胞的代謝狀態(tài)。同時，MTT和XTT等細胞活力檢測方法，也依賴于光度計來測定生成的有色產(chǎn)物的吸光度。

 

　　環(huán)境樣品分析

 

　　還可用于環(huán)境樣品的分析，如水質監(jiān)測和污染物檢測。通過測量水樣中有機物或重金屬離子的吸光度，可以評估水體污染程度。例如，酚類化合物在特定波長下具有吸收峰，通過光度法可以檢測水中酚類污染物的濃度。